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western和ELISA处理样本有何差别?

western和ELISA处理样本有何差别?

Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制剂),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm离心15min,取上清分装,即得到蛋白样品。建议直接电泳,多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量,一次性用完一支,避免反复冻融。

ELISA样品,直接脑组织冰上匀浆,收集于EP管,同上一样离心,大约220-250ul每支分装(因为ELISA上样量基本都是每孔100ul,做复孔,每个样品2孔,就需要200ul,为了避免不够2孔,分装时要大于200ul每支),直接实验。多余的-80保存,一样避免反复冻融。

不过ELISA*好少量样品进行预实验,或者查阅文献,看看大概组织里有多高浓度,选择合适的试剂盒,测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准,或者浓度过低,小于试剂盒*低可测浓度。

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