PinPoint Xa 蛋白纯化系统用来生产和纯化在体内连接了生物素的融合蛋白质。在一个载体上,将编码需要纯化蛋白质的DNA序列克隆在载体上的一个编码体内添加生物素的短肽序列的下游。连接生物素的融合蛋白在大肠杆菌内生成,然后用SoftLink软释放抗生物素蛋白树脂亲和纯化。这个树脂是**技术,可将蛋白质以非变性形式洗脱出来。PinPoint载体的特点是含有编码内源蛋白酶因子Xa(发音为Ten a)的蛋白水解位点,使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域,便于构建融合蛋白。
系统的几个载体含有所有可能的有义读码框,还含有连接着生物素的树脂、一个纯化柱以及生物素,PinPoint Xa对照载体含有氯素酶转乙酰基酶(CAT)基因,作为监控蛋白表达、纯化和加工条件的手段。在这个系统中,每升培养物一般产生1-5 mg蛋白。
特点
● 胞内添加生物素标签:用于纯化融合蛋白;得到的许多蛋白质是可溶的。
● 易于使用:可以通过柱子,也可以批量用SoftLink树脂纯化生物素标签蛋白质。
● 便于检测:链霉亲和素碱性磷酸酶可用于检测生物素标签的融合蛋白质,以假-Western方式,监控纯化过程。
● 灵活:所有读码框都有相应的PinPoint载体。
● 温和释放条件:SoftLink树脂允许在非变性条件下释放融合蛋白质。
● tac启动子:可以严格调控表达。
应用
● 纯化毫克数量的表达蛋白。
● 生产新颖的生物试剂。
● 与TetraLink 树脂同用可以制造亲和柱。