pMIR-REPORT miRNA表达报告基因载体系统由一个实验萤火虫荧光素酶报告载体和相关的β-半乳糖苷酶报告对照质粒组成。通过在多克隆位点插入预测的miRNA靶序列, pMIR-REPORT荧光素酶报告miRNA表达报告载体可以被用来进行准确的,定量的,评估细胞内miRNA的功能。它也可以被用来检测siRNA的靶位点和分析3'端非编码区序列对基因表达的影响。 pMIR-REPORT Luciferase载体包含一个CMV启动子和终止子控制下的萤火虫荧光素酶报告基因。在荧光素酶基因的3'端非编码区包含一个多克隆位点,用于插入的预测miRNA的结合靶序列或其他核苷酸序列。通过将预测的miRNA靶序列克隆插入到pMIR-REPORT载体,荧光素酶报告表达就收到调节。这模仿的miRNA靶序列的作用方式。
pMIR-REPORT β-gal质粒是一个β-半乳糖苷酶报告质粒,其被设计用于细胞转染操作流程的标准化探索。 该对照质粒表达的β-半乳糖苷酶,可以用来标准化由于细胞活力和转染效率差异导致的细胞表达水平的多样性。
作为附加的功能,pMIR-REPORT Luciferase和pMIR-REPORT β-gal分别含有嘌呤霉素和新霉素抗性基因,这可以用于选择转染成功的哺乳动物细胞。研究需要的话,***选择可用于构建pMIR-REPORT载体质粒稳表达细胞系。对于大多数应用,瞬表达是足够的,***的筛选也是没有必要的。