SIRT1抗体做wb时,一抗和二抗浓度是怎么确定的?怎么设置抗体滴度:
一抗的用量和样品中的目标分子含量相关,如果含量较高,就不需要用太多一抗,以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度(义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果),如果样品与厂家的不是一种细胞,可以尝试上下摸索一两个浓度梯度;
二抗的用量,和你所在实验室常规的用量就可以,如果出现效果不理想的状态,二抗的作用可以通过阳性对照和阴性对照、以及其他人的使用效果看出来有没有问题。
英文名称:SIRT1抗体
中文名称沉默调节蛋白1抗体
别 名75SirT1; BA57G10.4; hSIR2; hSIRT1; NAD dependent deacetylase SIRT1; NAD dependent deacetylase sirtuin 1; NAD dependent deacetylase sirtuin 2; Silent mating type information regulation 2; OTTHUMP00000198111; OTTHUMP00000198112; SIR2 like 1; SIR2 like protein 1; SIR2-like protein 1; Regulatory protein SIR2 homolog 1; SIR1_HUMAN; SIR2ALPHA; SIR2alpha protein; SIR2L1; SIR2L2; SIRT 1; SIRT-1; Sirt1; SIRT1 Sir2 like proteins (siruitins) type 1; SIRT1: sirtuin (silent mating type information regulation 2 homolog) 1 (S. cerevisiae); sirtuin (silent mating type information regulation 2 homolog) 1 (S. cerevisiae); SirtT1 75 kDa fragment; sirtuin (silent mating type information regulation 2 homolog) 1 (S. cerevisiae);Sirtuin 1; sirtuin; Sirtuin type 1; Sirtuin type 2.
JournalPMIDIFApplicationThe Journal of Immunology (2014)254525655.3620IF
说 明 书50ul 100ul 200ul
研究领域细胞生物 **学 染色质和核信号 微生物学 新陈代谢 表观遗传学
抗体来源Rabbit
克隆类型Polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Chicken, Cow, Horse, Rabbit,
产品应用WB=1:500-2000 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 Flow-Cyt=1μg/Test IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
SIRT1抗体分 子 量58/81kDa
细胞定位细胞核 细胞膜
性 状Lyophilized or Liquid
浓 度1mg/1ml
免 疫 原KLH conjugated synthetic peptide derived from human SirtT1 75 kDa fragment/NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1
亚 型IgG
纯化方法affinity purified by Protein A
储 存 液0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
SIRT1抗体ELISA如何选一抗与二抗:
一抗是与底物相结合的,同时一抗必须有抗原识别位点,能被另一种抗体识别并结合。
二抗是能与一抗的抗原识别位点识别并结合,同时,二抗必须有可以观测、计量的性质。
这些性质可以是:
①二抗本身带有颜色,可以通过分光度仪检测到二抗的浓度;
②二抗还可以作为一种酶,催化另一种底物,通过检测底物或者生成物的浓度检测出二抗的浓度;等等……有很多,就是说必须是可测量的。
SIRT1抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。收到抗体后请务必在12000rpm离心20-30s后再打开管盖进行分装和保存!抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象!