细胞系传代
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液,10mLPBS洗一遍 2.0.25%胰酶(预热20分钟左右)2ml消化,轻轻摇晃,直至肉眼见单层细胞呈块状脱落(或在显微镜下观察细胞之间分离),立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化,轻柔吹打8-10次成单细胞。 3.离心1000rpm*5min,弃上清,加DMEM+10%FBS轻柔吹打。 4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中,每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液,正常情况下2-3天就可以长满,期间不用换液。 因为我们用饲养层细胞铺皿而不是明胶包被,所以细胞系传代之前必须处理饲养层细胞。 1.饲养层细胞STO处理:当STO铺满平皿后,向培养液中加入100ul 1mg/mlmitomycinC(toxic, 操作时不要接触,作用是抑制STO增殖),轻轻摇晃平皿,保证丝裂霉素分布均匀,放置于培养箱中处理2h后,吸弃培养液,10mlPBS洗两遍(目的是把mitomycinC洗净),0.25%胰酶消化,5ml(DMEM+10%FBS)终止,离心1000rpm*5min弃上清,加DMEM+10%FBS后吹打均匀,种到新的100mm细胞培养皿,补齐培养液至10ml。置于培养箱中过夜。 2.**天早上传干细胞: (1)细胞系传代吸弃旧培养液,10mlPBS洗一遍,2ml 0.25%胰酶消化,边消化边轻轻晃动培养皿,4-5min后镜下观察发现发部分细胞脱落,成小的细胞团块,加8ml DMEM+10%FBS终止消化,轻柔吹打。 (2)然后将液体转移到15ml塑料离心管中,静置10-15min,吸弃上清,加2mlES培养液。 (3)将滴管在酒精灯下拉成非常细的玻璃管,吹打1-2次,尽量将ES吹散 (4)将前**铺好的STO的培养液吸弃,换成10ml的ES培养液(操作要小心,不然STO很容易脱落),再把塑料离心管中的ES1:3或1:4(视情况而定)传到铺好的STO皿中,前后左右垂直晃动几下,使干细胞分布均匀,置于培养箱中,每天换液,两到三天传代。 细胞系传代应该注意的问题: 1.STO不管是在ES传代还是换液过程中都可能因为加液体速度过快而脱落,所以*好靠近培养皿壁先一滴一滴加,避免液体直接打在STO上。 2.玻璃管拉得尽量细一些。 3.一定要把mitomycin洗干净 我养过很多细胞,肿瘤细胞和正常细胞都有,总的感觉是肿瘤细胞要比正常细胞好养。先介绍一下目前手头正在养的两株细胞。 SNU-398:人肝癌细胞,培养液是1640+10mmol/LHEPES+1mmol/L丙酮酸钠+1.5g/L碳酸氢钠+10%FBS PLC/PRF/5:人肝癌细胞,培养液是EMEM+0.1mmol/L非必需氨基酸+1mmol/L丙酮酸钠+1.5g/L碳酸氢钠+10%FBS 消化液是0.25%胰酶+0.03%EDTA 两株细胞都是贴壁细胞,SNU-398消化时需先加入1ml(25cm2)消化液,使消化液均匀覆盖瓶底后倒掉,然后再加入1ml消化液,室温放置3分钟左右,加入培养液8ml中止消化,吹打使细胞分散(动作要轻,避免气泡),再分别将细胞液各3ml加入另外两个新瓶子,添加培养液至8ml/瓶,继续培养 PLC/PRF/5消化时只需加入1ml(25cm2)消化液,细胞系传代使消化液均匀覆盖瓶底后静置5分钟左右,轻拍培养瓶几下,然后加入培养液,一般也是一传三,操作同SNU-398。
HZ-3/DDP 卵巢癌顺铂耐药株 HZco-2 结肠癌细胞 HZLa 宫颈癌细胞 HZLo205 结肠癌细胞 HZlaS3 宫颈癌细胞 HZ320DM 结肠癌细胞 HZC-1B **内膜癌细胞 HZCT-8 回盲肠腺癌细胞 HZEG-3 绒癌细胞 HZCT-116 低分化结肠腺癌细胞 HZU-145 前列腺癌细胞 HZT-29 结肠腺癌细胞 HZNCa 前列腺癌细胞 HZovo 结肠癌细胞 HZone 前列腺癌细胞 HZ480 结肠癌细胞 HZC-3 前列腺癌细胞 HZ-7402 肝细胞癌细胞 HZsu-Pr1 非雄**依赖型前列腺癌 HZC-9204 肝癌细胞 HZOS 骨肉瘤细胞 HZ3B 肝癌细胞 HZG-63 成骨肉瘤细胞 HZG2 肝癌细胞 HZos-2 骨肉瘤细胞 HZ-7721 肝癌细胞 HZ-2 OS 骨肉瘤细胞 HZAN-1 胰腺导管上皮癌细胞 HZS-732 骨肉瘤细胞(瘤株) HZ1005 胰腺腺癌细胞 HZ-204 横纹肌肉瘤细胞 HZW1990 胰腺腺癌细胞 HZ1080 纤维肉瘤细胞
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